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三分彩app,外植体的接种和培养_基础医学_医药卫生_专业资料

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三分彩app,外植体的接种和培养_基础医学_医药卫生_专业资料。第五章 三分彩app,外植体的接种和培养 第一节 三分彩app,外植体的接种 第二节 三分彩app,外植体的褐变及其预防措施 第四节 三分彩app,外植体的接种 三分彩app,外植体的接种——是把经过表面消毒后的植物 材料切碎或分离出器官、组织、细胞,并将它 们转放


第五章 三分彩app,外植体的接种和培养 第一节 三分彩app,外植体的接种 第二节 三分彩app,外植体的褐变及其预防措施 第四节 三分彩app,外植体的接种 三分彩app,外植体的接种——是把经过表面消毒后的植物 材料切碎或分离出器官、组织、细胞,并将它 们转放到无菌培养基上的全部操作过程。三分彩app整个 接种过程均须无菌操作。操作过程中引起的污 染,主要由空气中的细菌和工作人员本身引起 的。因此除接种室空气消毒外,应特别注意防 止工作人员本身引起的污染。 ?1.操作人员需着经消毒的白色工作服, ? 戴口罩。进入接种室前,工作人员的双 手必须进行消毒,用肥皂和水洗涤能达 到良好的效果, 进行操作前再用70%的 酒精擦洗双手。三分彩app 2 . 操 作 期 间 经 常 用 70% 的 酒 精 擦 拭 双手和台面。特别注意防止“双重 传递”的污染,例如器械被手污染 后又污染培养基等。 3. 在打开培养瓶、三角瓶或试管时,最大 的污染危险是管口边沿沾染的微生物落 入管内,解决这个问题,可在打开前用 火焰烧瓶口。如果培养液接触了瓶口, 则瓶口要烧到足够的热度,以杀死存在 的细菌。为避免灰尘污染瓶口,可用纸 包扎瓶口和塞子,以遮 盖瓶子颈部和试 管口,相对地减少污染机会。 4.工具用后及时消毒,避免交叉污染。 5.工作人员的呼吸也是污染的主要途径。通 常在平静呼吸时细菌是很少的,但是谈话 或咳嗽时细菌便增多,因此操作过程应禁 止不必要的谈话并戴上口罩。 ? 6.由于空气中有灰尘,因此在操作时,仍 要注意避免灰尘的落入。尽量把盖子盖好, 当打开瓶子或试管时,应拿成斜角,以免 灰尘落入瓶中。刀、剪、镊等用具,一般 在使用前浸泡在95%酒精中,用时在火焰上 消毒,待冷却后使用。每次使用前均需进 行用具消毒。 第五节 三分彩app,外植体的褐变及其预防措施 一、什么叫褐变? 褐变——是指三分彩app,外植体在培养过程,自身组织 从表面向培养基释放出褐色物质,以致培 养基逐渐变成褐色,三分彩app,外植体也随之进一步 变褐而死亡的现象。 二、褐变的原因是什么? 褐变的发生与三分彩app,外植体组织中所含的酚类化合 物多少和多酚氧化酶活性有直接关系。但 酚类很不稳定,在溢出过程中与多酚氧酶 接触,在多酚氧化酶的催化下迅速氧化成 褐色的醌类物质和水,醌类又会在酪氨酸 酶等的作用下,与三分彩app,外植体组织中的蛋白质 发生聚合,进一步引起其他酶系统失活, 从而导致组织代谢紊乱,生长停滞不,最 终衰老死亡。 三、影响褐变的因素有哪些? 随着植物种类、基因型、三分彩app,外植体的部位及生理状 况等的不同,褐变的程度也有所不同。 1.植物材料 (1)基因型 不同种植物,同种植物不同类型 、不同品种在组织培养中褐变发生的频率、严重程 度都存在很大差别。人们已经注意到,木本植物( 木质素)、单宁含量或色素含量高的植物容易发生 褐变。这是因为酚类的糖苷化合物是木质素、单宁 和色素的合成前体,酚类化合物含量高,木质素、 单宁或色素形成就多,而酚类休合物含量高将导致 褐变的发生,因此,木本植物一般比草本植物容易 发生褐变。 ? (2)材料年龄 幼龄材料一般都有比成龄 材料褐变轻的趋势。平吉成从小金海棠、八 楞海棠和山定子刚长成的实生苗上切取茎尖 进行培养,接种后褐变很轻,随着苗龄增长, 褐变逐渐加重,取自成龄树上的茎尖褐变就 更严重。幼龄材料褐变较轻与其酚类化合物 含量少有关。Chever分析欧洲栗的酚类含量 变化的结果表明,幼龄材料酚类化合物含量 少,而成龄材料比较多。 ? (3)取材部位 Yu和Meredith在葡萄上发 现从侧生蔓切取茎尖进行培养,比从延长 蔓切取的茎尖更容易成活,进一步分析酚 类含量发现前者比后者少。而苹果则顶芽作 三分彩app,外植体褐变程度轻,比侧芽容易成活。石竹和菊 花也是顶端茎尖比侧芽茎尖更容易成活。分生部 位接种后醌类物质形成少;而分化部位接种后醌 类物质形成多。 ? (4)取材时期多酚氧化酶活性和酚类含 量基本是对应的,春季较弱,随着生长 季节的到来,酶活性逐渐增强,因而有 人认为取材时期比取材部位更加重要。 Chever报道,欧洲栗在1月15日-30日醌 类物质形成少,而在5月-6月醌类物质明 显提高。 (5)三分彩app,外植体大小及受伤害程度 ? 蒋迪军和牛建新报道,金冠苹果茎尖小于0.5mm时 褐变严重,当茎尖长度在5mm-15mm时褐变较轻,成活 率可达85%。在多个苹果品种上试验结果表明,用 5mm-10mm长的茎尖进行培养效果最好,茎尖如果太 小很容易发生褐变。另外,取三分彩app,外植体时还要考虑其 粗度,细的可切短些,粗的可切得长些。 ? 2.培养条件 ? 主要是光照与温度。温度过高或光照 过强,均可使多酚氧化酶的活性提高, 从而加速三分彩app,外植体的褐变。 3.培养基 ? (1)培养基状态 由于培养基中琼脂的 用量和pH值的高低不同,培养基可配成 固体培养基、半固体培养基或液体培养 基。许多试验证明,液体培养基可经有 效克服三分彩app,外植体褐变,液体培养基再加上 滤纸桥,效果就更好。在液体培养基中, 三分彩app,外植体溢出的有毒物质可以很快扩散, 因而对三分彩app,外植体造成的伤害较轻。 (2)无机盐 ? 在初代培养时,培养基中无机盐浓度过 高,酚类物质将会大量外溢,导致外植 体褐变。原因是无机盐中的有些离子, 如Mn2+、Cu2+是参与酚类合成与氧化酶类 的组成成分或辅因子,因此盐浓度过高 会增加这些酶的活性,酶又进一步促进 酚类合成与氧化。 ? (3)植物生长调节物质 有报道说,初代 培养处在黑暗条件下,生长调节物质的存 在是影响褐变的主要原因,此时去除生长 调节物质可减轻褐变。细胞分裂素6-BA或 KT不仅能促进酚类化合物的合成,而且还 能刺激多酚氧化酶的活性,这一现象在甘 蔗的组织培养中十分明显。而生长素类如2, 4-D和IAA可延缓酚类化合物的合成,减轻 褐变现象发生。 ? (4)抗氧化剂 培养基中加入抗氧化剂可 改变三分彩app,外植体周围氧化还原电势,从而抑制 酚类氧化,减轻褐变。 ? (5)吸附剂 活性炭和聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)作为吸附剂可以去除酚类氧
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